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BY4742 酵母感受態細胞

簡要描述:BY4742 酵母感受態細胞 保存條件:-80℃ 酵母促轉化劑 100μl -20℃畢赤酵母轉化液 5 ml 4℃

  • 產品型號:ABG722-50
  • 產品品牌:Abnbio
  • 更新時間:2024-03-28
  • 訪  問  量:624

詳細介紹

品牌Abnbio貨號ABG722-50
規格50X100ul供貨周期現貨
主要用途感受態細胞應用領域環保,食品/農產品,化工,生物產業,制藥/生物制藥

簡要說明

BY4742菌株來源于釀酒酵母原始菌株——S288C,是實驗室的常用菌株,可直接通過PEG/LiAc將pYES2質粒轉化進入BY4742細胞內。質粒pYES2的篩選標志為URA,可用SD-URA板板進行篩選。BY4742感受態細胞經特殊工藝制作,pYES2質粒檢測轉化效率>104 cfu/μg DNA。


操作說明:

1、取一支無菌的1.5ml EP管,依次加入預冷的目的質粒1-3µg,Carrier DNA 10µl(95-100 度5min 快速冰浴,重復一次),100µl冰上融化的AH109感受態細胞,PEG/LiAc500µl,輕輕翻轉混勻6-8次; 

2. 30℃水浴30min,每10min輕輕翻轉混勻6-8次;

3. 每支加入20µl的二甲基亞砜;(用于提高轉化效率,可不做)

4. 42℃水浴15min,每5min輕輕翻轉混勻6-8次;

5. 12000rpm瞬時離心棄上清,每支加入1ml的YPDPlus于30℃復蘇1h;(用于提高轉化效率,可不做)

6. 12000rpm瞬時離心棄上清,用100µl 0.9%NaCl重懸,涂板,30℃培養48-96h。


注意事項

1、感受態細胞最好在冰上融化。

2. 若使用pYES2質粒表達蛋白,需在培養基中加入2%的半乳糖(篩選培養基中不用加半乳糖;當需要目的蛋白表達時,需加入半乳糖代替葡萄糖作為碳源),以誘導目的基因的表達。

3. 轉化高濃度的質粒可相應減少最終用于涂板的菌量。

4. 同時轉化2-3種質粒時可增加質粒的用量。

5. 酵母為真核生物,不易長期保存,隨感受態在-80℃保存時間的延長,轉化效率會不斷下降,建議保存時間不超過90天。

6. BY4742酵母菌株對高溫敏感,最適生長溫度為27-30℃;高于31℃,生長速度和轉化效率呈指數下降。

7. 酵母在缺陷培養基中生長速度比YPDA培養基慢,培養基中缺陷成分越多,生長越慢,以轉化涂板為例:涂YPDA平板29℃,48 h培養可見直徑1 mm克隆;涂SD單缺平板29℃,48-60h培養可見直徑1 mm克隆,涂SD雙缺平板29℃,60-80h培養可見直徑1 mm克隆,涂SD三缺或四缺平板平板29℃,80-90h培養可見直徑1 mm克隆。















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  • 公司傳真:4009005473
  • 郵箱:sale@abnbio.com

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