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Electroporation發根(電擊)感受態細胞

簡要描述:Ar Qual Electroporation-Competent Cell/Electroporation發根(電擊)感受態細胞
保存條件:-80℃

  • 產品型號:Ar Qual
  • 產品品牌:Abnbio
  • 更新時間:2024-03-25
  • 訪  問  量:487

詳細介紹

品牌Abnbio貨號ABN407-50
規格50支50ul供貨周期現貨
主要用途細胞培養應用領域化工,生物產業,制藥/生物制藥

Ar Qual Electroporation-Competent Cell 發根(電擊)感受態細胞

基因型:

Agrobacterium rhizogenes (strR,CamR ) Ar Qual Ri(agropine type

簡要說明:

發根農桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細菌,它能夠感染大多數雙子葉植物和少數單子葉植物以及個別裸子植物。Ar.A4發根農桿菌菌株含有農桿堿型Ri質粒,具有廣泛的宿主范圍(玉米,煙草,胡蘿卜,甘草等),同時具有ka那霉素抗性。Ar Qual發根農桿菌電轉感受態特別適用于大質粒的轉化:經pK7WGF2質粒 (size:11876 bp)檢測轉化效率>105 cfu/μg DNA。

操作說明:

一: 0.1 cm電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘,待其瀝干水分,正置5分鐘,使乙醇充分揮發,待乙醇揮發干凈立即插入冰中,壓實冰面,電極杯頂離冰面0.5 cm以方便蓋上杯蓋,冰中靜置5分鐘充分降溫。

二: 取-80℃保存的農桿菌感受態插入冰中5分鐘,待其融化,加入0.01-1 μg質粒DNA(體積不大于6ul,最好用試劑盒抽提,雙蒸水溶解;轉化效率較高,第一次使用前最好做預實驗確定所加質粒的量),用手bo打管底混勻,立即插入冰中,用200μl槍頭將感受態-質粒混合物快速移到電擊杯中,蓋上杯蓋,空管保留待用。

三:啟動電轉儀,設置參數:C=25 μF,PC=200 ohm,V=2400 V(此參數為Biorad 推薦,使用者也可按所用電轉儀推薦的protocol操作),將電擊杯從冰中拿出,吸水紙吸干外表面水份,快速放入電轉槽中,啟動電擊,電擊完成快速插入冰中,加入1 ml無抗生素的TY,并轉移到感受態空管中,28℃振蕩培養2~3小時。

四: 6000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的TY平板上,倒置放于28℃培養箱培養2-3天。

注意事項:

一:加入質粒時體積不應大于感受態體積的1/10;質粒不純或存在乙醇等有機物污染,轉化效率急劇下降;質粒增大一倍,轉化效率下降一個數量級。

二: 電轉感受態細胞中不可混入氣泡,轉化高濃度的質粒可相應減少最終用于涂板的菌量。

三:平板上陽性克隆密度過大時,由于營養不足,陽性克隆生長變慢,菌落變小,為了獲得大的菌落,應減少質粒用量或最終用于涂板的菌量。

四:Ar.Qual具有lian霉素、lu霉素抗性,不可用于具有lian霉素抗性或lu霉素抗性質粒的轉化。





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