DH10B Chemically Competent Cell

基因型：

F- mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZ?M15 ?lacX74 recA1endA1 araD139 ?(ara, leu)7697 galE15 galK λ- rpsL nupG

簡要說明：

DH10B菌株來源于MC1061菌株，mcrA、mcrBC及mrr突變使DH10B菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA（Therefore , genomic DNA , both prokaryotic andeukaryotic, can be cloned efficiently in DH10B）。recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。φ80dlacZ?M15 marker的存在使DH10B可用于藍白斑篩選，rpsL賦予其LIAN霉素抗性。 

5TM系列DH10B感受態細胞經特殊工藝制作，經pUC19質粒檢測轉化效率>108cfu/μg。

操作說明：

1.DH10B感受態細胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態時迅速插入冰中），加入目 的DNA（質粒或連接產物）并用手打EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。 

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。 

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的2YT或LB無菌培養基，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。 

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。 

5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養至少13h。

注意事項：

1.感受態細胞最好在冰上融化。 

2.混入質粒或連接產物時應輕柔操作。 

3.轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。