XL1-Blue MRF`Kan Chemically Competent Cell      保存條件：-80℃

基因型：

?(mcrA)183 ?(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1recA1 gyrA96 relA1 lac [F′proAB lacIqZ?M15 Tn5 (KanR)

簡要說明：

XL1-Blue MRF’Kan 菌株來源于 XL1-Blue 株系，是限制酶系統(tǒng)缺失型[? (mcrA)183, ? (mcrCB-hsdSMR -mrr)173],且具有KA那霉素抗性 (Kanr )，可轉化具有l(wèi)u霉素或四環(huán)素抗性的質粒。recA1 和 endA1 的突變 有利于插入 DNA的穩(wěn)定和高純度質粒 DNA 的提取。hsdR17 突變導致 EcoK 核酸內切酶系統(tǒng)缺失，增強了 外源 DNA 的穩(wěn)定性和提取質量。lacI q ZΔM15 的存在使 XL1-Blue MRF’Kan 菌株可用于藍、白斑篩選。 XL1-Blue MRF’Kan 感受態(tài)細胞經特殊工藝制作，pUC19 質粒檢測轉化效率>108 cfu/μg DNA。

操作說明：

1.XL1-Blue MRF’Kan 感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，待菌塊融化，加入目的 DNA 并用 手打 EP 管底充分混勻，冰中靜置 25 分鐘。

2.42℃水浴熱激 45 秒，迅速放回冰上并靜置 2 分鐘，晃動會降低轉化效率。

3.向離心管中加入 700 μl 不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT 或LB)，混勻后 37℃，200 rpm 復蘇 60 分鐘。

4.5000 rpm離心一分鐘收菌，留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的 2YT 或 LB 培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于 37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

注意事項：

1.感受態(tài)細胞最好在冰中緩慢融化，插入冰中 8 分鐘內加入目標 DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存 放會降低轉化效率。

2.XL1-Blue MRF’Kan 感受態(tài)細胞具有KA 那霉素抗性，不可轉化具有KA 那霉素抗性的質粒。

3. 轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。