Chemically Competent Cell克隆感受態細胞     Mach1-T1 Chemically Competent Cell 

基因型：

F- φ80(lacZ)ΔM15 ΔlacX74 hsdR(rK- mK+) ΔrecA1398endA1 tonA

簡要說明：

Mach1-T1 菌株由野生型 non-K-12 E. Coli W 菌株改造而來，是目前生長速度較快的感受態細胞之一，在平板上 9 h 可見克隆，缺失核酸內切酶 (endA)，提高了質粒 DNA 的產量和質量；重組酶缺陷型 (recA1398)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入 DNA 的穩定性；lacZ M15 的存在使 Mach1-T1 可用于藍、白斑篩選；tonA 突變賦予 Mach1-T1 菌株對噬菌體T1 和 T5 的抗性。Mach1-T1 感受態細胞 經特殊工藝制作，pUC19 質粒檢測轉化效率>5x108 cfu/μg DNA

操作說明：

1.Mach1-T1 感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，待菌塊融化，加入目的 DNA（質?；蜻B接 產物）并用手打 EP 管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置 25 分鐘。

2.42℃水浴熱激 45 秒，迅速放回冰上并靜置 2 分鐘，晃動會降低轉化效率。

3.向離心管中加入 700 μl 不含抗生素的無菌2YT 或 LB培養基，混勻后 37℃，200 rpm 復蘇 60 分鐘。

4.5000 rpm 離心一分鐘收菌，留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的 2YT 或 LB 培養基上。

5.將平板倒置放于 37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放 37℃培養至少 13 h。

注意事項：

1.感受態細胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中 8 分鐘內加入目標 DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間 存放會降低轉化效率。

2.混入目的 DNA 時應輕柔操作。

3.轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。